使用奧林巴斯體視顯微鏡 SZ61 進(jìn)行斑馬魚(yú)器官組織的熒光觀察，可參考以下步驟：

觀察前準(zhǔn)備

斑馬魚(yú)樣品制備：選擇合適發(fā)育階段的斑馬魚(yú)胚胎或幼魚(yú)，例如兩天大的幼魚(yú)。在斑馬魚(yú)產(chǎn)下胚胎后，將其分離并飼養(yǎng)在 28 攝氏度的 E3 水溶液中，在最初的 24 小時(shí)里加入 0.003% 1 - 苯基 - 2 - 硫脲溶于 10% 生理鹽水的 PTU 溶液，以抑制斑馬魚(yú)早期的色素分泌，保持其透明性。成像前，將斑馬魚(yú)固定在瓊脂糖中，具體是加熱熔解 1% 的瓊脂糖并鋪滿培養(yǎng)皿底部，冷卻凝固后，將斑馬魚(yú)幼魚(yú)攜帶少量 E3 溶液釋放在瓊脂糖上，再滴加 1-2 滴熔解的瓊脂糖并冷卻凝固，最后加入 E3 溶液。

顯微鏡熒光附件安裝：安裝熒光附件，包括熒光光源及濾光片。根據(jù)實(shí)驗(yàn)中使用的熒光標(biāo)記物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)，選擇合適的熒光濾光片。

顯微鏡操作

開(kāi)啟與調(diào)節(jié)：打開(kāi)顯微鏡電源開(kāi)關(guān)，旋轉(zhuǎn)亮度調(diào)節(jié)按鈕，調(diào)節(jié)熒光光源到適當(dāng)?shù)牧炼取?/p>

樣品放置：將固定有斑馬魚(yú)的培養(yǎng)皿放在顯微鏡工作臺(tái)上。

對(duì)焦與觀察：調(diào)節(jié)對(duì)焦旋鈕，使鏡臂上下移動(dòng)，讓焦點(diǎn)落在標(biāo)本上，獲得清晰的圖像。通過(guò)目鏡觀察熒光標(biāo)記的器官組織的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，同時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)變倍筒左右側(cè)的變倍旋鈕，根據(jù)需要改變樣品圖像的放大倍數(shù)，以觀察不同層次的細(xì)節(jié)。若有需要，可調(diào)整觀察筒的距離和屈光度，以適應(yīng)不同觀察者的眼睛狀況。

觀察與記錄

觀察內(nèi)容：注意觀察熒光標(biāo)記在斑馬魚(yú)器官組織中的分布情況，例如特定基因表達(dá)導(dǎo)致的熒光蛋白在某個(gè)器官中的特異性表達(dá)，或者熒光染料標(biāo)記的細(xì)胞在組織中的位置和形態(tài)等。

圖像記錄：如果顯微鏡配備了數(shù)碼攝像頭，可將其連接到顯微鏡的三目鏡筒上，通過(guò)相關(guān)軟件界面觀察樣品圖像，并進(jìn)行實(shí)時(shí)記錄和分析，方便后續(xù)進(jìn)一步研究和對(duì)比。

觀察后處理

關(guān)閉電源：觀察結(jié)束后，關(guān)掉電源，取走樣品。

清潔與維護(hù)：對(duì)顯微鏡進(jìn)行清潔，用干凈的軟布擦拭鏡頭和載物臺(tái)等部件，防止灰塵和污漬影響下次使用。將顯微鏡用防塵罩嚴(yán)密保護(hù)起來(lái)，以防止灰塵進(jìn)入光學(xué)系統(tǒng)和其他部件。